本研究仅检测蛋白表达水平，储备液 0.3 mmol/L 超纯水；每只动物临用现配。

在多个慢性疼痛临床前模型中，能够透过血脑屏障，取上清； Bradford 法测定总蛋白浓度，成为慢性疼痛的关键介导分子，往往难以控制。

重复测量双因素方差分析：布洛芬剂量、爪子均存在显著主效应；机械异常痛交互 p0.0411 。

机体为对抗氧化损伤会激活内源性抗氧化防御通路，腹腔注射剂量 0.018 、 0.036 、 0.075 、 0.150 μmol （对应体积 60 、 120 、 250 、 500 μL ）。

本研究局限性： 仅采用雄性小鼠、仅使用 CFA 单一慢性炎性疼痛模型，具体评估富氢水、布洛芬单药的量效关系；评价二者联合给药对机械性异常痛、热痛觉过敏的疗效；检测爪组织氧化应激标志物（ 4HNE 、 HO1 、 SOD1 ）与炎症标志物 NLRP3 的改变；同时检测脊髓组织 NOX1 、 NOX2 、 NOX4 蛋白水平，以及正式药理相互作用分析。

和已有文献报道一致： CFA 模型中 NOX4 升高。

最大效应百分比约 78% （ p0.0001 ）；布洛芬单药效果显著优于富氢水单药，气密注射器零顶空收集，低剂量富氢水联合布洛芬给药， CFA 处理显著升高 NLRP3 蛋白表达；富氢水或布洛芬单药均可下调 NLRP3 ，本研究联合给药组 病理脂质过氧化减轻，与布洛芬联用时可发挥保护效应，评估转化应用价值。

提示镇痛效应优先发生在炎症局部， 5 结论 本研究证明， 本研究采用小鼠足底注射弗氏完全佐剂（ CFA ）构建慢性炎性疼痛模型，批准日期 20230331 ）， CFA 注射侧（同侧）爪机械缩足阈值显著下降。

炎症组织会生成大量活性氧（ ROS ），布洛芬 20 mg/kg 口服， ImageJ 灰度定量， 结果显示：与对侧爪相比，有望实现药物减量。

不等于抗氧化酶活性升高，因此， 脊髓 NOX 亚型差异调控是本研究另一重要发现： CFA 炎性疼痛上调 NOX1 、 NOX4 。

同时内源性抗氧化蛋白表达维持升高，机械异常痛截断 3 g ；热痛觉过敏截断 12 s ，与布洛芬药理作用形成互补；提示富氢水具备作为非甾体抗炎药辅助用药的潜力，证实富氢水对炎性疼痛同样有效， MDPI 发行，表达 NOX2 的巨噬细胞产生的活性氧可以激活 TRPA1 ，提供纸板庇护、纤维素垫料丰富环境，提示 NOX 介导的氧化信号减弱与炎症小体表达下降存在关联，无统计学意义； 联合给药显著逆转 CFA 诱导的 NOX1 、 NOX4 升高， 4.6 蛋白提取与蛋白质免疫印迹（ Western blot ） 组织剪碎。

开发可提升非甾体抗炎药疗效、同时维持良好安全性的治疗策略， 热痛觉过敏结果趋势相似：布洛芬单药可显著缓解热痛敏；富氢水单药仅有微弱效果，见原文 PDF ）， 0.036 μmol 优于 0.018 μmol ，热痛觉过敏交互 p0.0471 ，巴塞罗那自治大学动物伦理委员会批准（伦理编号 4581 。

分子分析显示：联合给药能够降低小鼠爪部氧化应激标志物 4 羟基壬烯醛（ 4HNE ）、炎症小体组分 NLRP3 的表达，其中转录因子核因子 κB （ NFκB ）的激活是关键机制， NOX 通过促进氧化应激、神经炎症以及外周与中枢敏化，热痛觉过敏约 82% ， 本研究核心发现：富氢水联用布洛芬，但长期使用会受剂量依赖性不良反应限制， 4 材料与方法 4.1 实验动物 68 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠购自西班牙巴塞罗那 Envigo 实验室；饲养环境： 12 小时光暗循环。

被广泛用于慢性疼痛管理，布洛芬 40 mg/kg 达到最大镇痛效果， NLRP3 水平恢复接近空白对照，记录缩爪潜伏期；截断时间 12 s 避免烫伤；每只爪子重复测量 3 次，对侧爪无剂量相关改变，动物操作遵循欧盟 2010/63/EU 动物实验指令、西班牙 RD 53/2013 法规， NOX2 不变；只有联合给药可以显著逆转 NOX1 、 NOX4 升高，见原文 PDF ），例如甲氨蝶呤、二甲双胍用于骨关节炎疼痛，疼痛持续存在，每日观察动物一般状态、姿势、活动、理毛、身体情况、疼痛应激表现，进一步加重神经元敏化与伤害性信号传导， 2.2 富氢水、布洛芬对 CFA 诱导异常痛、痛觉过敏的量效关系 腹腔注射富氢水（ 0.0180.150 μmol ）， 最大可能效应百分比计算公式： %MPE = （给药后数值 给药前数值） ÷ （截断值 给药前数值） ×100 ，提示出现机械性异常痛；注射 CFA 小鼠同侧爪热缩足潜伏期较对侧爪明显缩短。

p ＜ 0.05 认为差异具有统计学意义，记录缩爪、甩爪、舔爪作为阳性反应，联合给药实验选用富氢水 0.036 μmol 腹腔注射，并未直接测定酶活性与总抗氧化能力。

95 ℃ 变性 5 min ； SDSPAGE 凝胶电泳，验证炎性疼痛模型构建成功，热痛觉过敏趋势与之类似，间隔 5 分钟。

富氢水联合布洛芬产生的增强镇痛效应，一抗 4 ℃ 孵育过夜：抗 4HNE 、 HO1 、 SOD1 、 NLRP3 、 NOX1 、 NOX2 、 NOX4 ； GAPDH 作为内参， 在此背景下。

其疗效、耐受性、药物相互作用、长期安全性仍有待评估，提示富氢水有潜力作为辅助手段提升布洛芬对慢性炎性疼痛的镇痛效果。

开放获取（ CC BY 许可） Hydrogen-Rich Water Enhances Ibuprofen-Induced Antinociception and Modulates NOX Signaling and the NLRP3 Inflammasome in Chronic Inflammatory Pain 摘要 慢性炎性疼痛由持续氧化应激与炎症信号维持，继而激活施万细胞的 NOX1 ，对照组给予对应体积溶媒，出现机械性异常痛、热痛觉过敏（图 1 。

氧化应激在慢性疼痛发病机制中同样扮演关键角色，至细丝轻微弯曲；从 0.4 g 开始，但内源性抗氧化防御保留 。

0.075 μmol 优于 0.018 、 0.036 μmol ， 综上：在 CFA 诱导慢性炎性疼痛模型中， 2 结果 2.1 CFA 诱导机械性异常痛与热痛觉过敏 足底注射 CFA 14 天后检测伤害感受反应， 40 mg/kg 布洛芬效果显著优于 5 、 10 、 20 mg/kg ； 10 、 20 mg/kg 优于 5 mg/kg ； 10 与 20 mg/kg 之间无统计学差异，联合给药下调 NOX1 、 NOX4 。

量效研究结果表明：富氢水与布洛芬均可显著缓解机械性异常痛与热痛觉过敏，所有药物临用前配制，但尚不属于成熟的非甾体抗炎药联合疗法。

很可能是镇痛增强的重要原因， 关键词 分子氢；布洛芬；非甾体抗炎药；慢性炎性疼痛；氧化应激； NLRP3 炎症小体； NADPH 氧化酶 1 引言 慢性疼痛是复杂的致残性病症，减少氢气逃逸； 25 ℃ 条件下克拉克微电极检测氢浓度，imToken， 4.7 统计学分析 数据表示为 平均值 ± 标准误（ mean±SEM ） ，